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　　一、A型題(每小題1分)

　　1. 在分子生物學領域，分子克隆主要是指(A)

　　A.DNA的大量復制

　　B.DNA的大量轉錄

　　C.DNA的大量剪切

　　D.RNA的大量反轉錄

　　E.RNA的大量剪切

　　2.在分子生物學領域，重組DNA又稱(D)

　　A.酶工程

　　B.蛋白質工程

　　C.細胞工程

　　D.基因工程

　　E.DNA工程

　　3.在重組DNA技術中，不常用到的酶是(E)

　　A.限制性核酸內切酶

　　B.DNA聚合酶

　　C.DNA連接酶

　　D.反轉錄酶

　　E.DNA解鏈酶

　　4.多數限制性核酸內切酶切割后的DNA末端為(D)

　　A.平頭末端

　　B.3'突出末端

　　C.5'突出末端

　　D.粘性末端

　　E.缺口末端

　　5.可識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類酶稱為(B)

　　A.限制性外切核酸酶

　　B.限制性內切核酸酶

　　C.非限制性外切核酸酶

　　D.非限制性內切核酸酶

　　E.DNA內切酶

　　6.cDNA是指(A)

　　A. 在體外經反轉錄合成的與RNA互補的DNA

　　B.在體外經反轉錄合成的與DNA互補的DNA

　　B. 在體外經轉錄合成的與DNA互補的RNA

　　D.在體內經反轉錄合成的與RNA互補的DNA

　　E.在體內經轉錄合成的與DNA互補的RNA

　　7.基因組代表一個細胞或生物體的(B)

　　A.部分遺傳信息 B.整套遺傳信息 C.可轉錄基因

　　D.非轉錄基因 E.可表達基因

　　8.在基因工程中通常所使用的質粒存在于(C)

　　A.細菌染色體 B.酵母染色體 C.細菌染色體外

　　D.酵母染色體外 E.以上都不是

　　9.就分子結構而論，質粒是(A)

　　A.環狀雙鏈DNA分子 B.環狀單鏈DNA分子 C.環狀單鏈RNA分子

　　D.線狀雙鏈DNA分子　　E.線狀單鏈DXlA分子

　　10.聚合酶鏈反應可表示為(E)

　　A.PEC B.PER C.PDR D. BCR E.PCR

　　11.在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是(D)

　　A.化學合成法 B.基因組文庫法 C.cDNA文庫法

　　D.聚合酶鏈反應 E.差異顯示法

　　12.重組DNA的基本構建過程是將(C)

　　A.任意兩段DNA接在一起 B. 外源DNA接入人體DNA

　　C.目的基因接入適當載體 D.目的基因接入哺乳類DNA E.外源基因接入宿主基因

　　13.催化聚合酶鏈反應的酶是(E)

　　A.DNA連接酶

　　B.反轉錄酶

　　C.末端轉移酶

　　D.堿性磷酸酶

　　E.TaqDNA聚合酶

　　14.將內切酶切割后的目的基因與用相同內切酶切割后的載體DNA連接屬(D)

　　A. 同聚物加尾連接 B.人工接頭連接 C.平端連接

　　B. D.粘性末端連接 E.非粘性末端連接

　　15.限制性核酸內切酶切割DNA后產生(B)

　　A.3'磷酸基末端和5'羥基末端 B.5'磷酸基末端和3'羥基末端

　　C.3'磷酸基末端和5'磷酸基末端 D.5'羥基末端和3'羥基末端

　　E.3'羥基末端、5'羥基末端和磷酸

　　16.重組DNA技術中實現目的基因與載體DNA拼接的酶是(D)

　　A.DNA聚合酶 B.RNA聚合酶 C. DNA連接酶

　　D.RNA連接酶 E.限制性核酸內切酶

　　17.以質粒為載體，將外源基因導人受體菌的過程稱(A)

　　A.轉化 B.轉染 C.感染 D，轉導 E.轉位

　　18.最常用的篩選轉化細菌是否含質粒的方法是(B)

　　A.營養互補篩選 B.抗藥性篩選 C.免疫化學篩選

　　D.PCR篩選 E.分子雜交篩選

　　19.互補篩選法屬于(C)

　　A. 抗藥性標志篩選 B.酶聯免疫篩選 C.標志補救篩選

　　D.原位雜交篩選 E.免疫化學篩選

　　20.下列常用于原核表達體系的是(E)

　　A. 酵母細胞 B.昆蟲細胞 C.哺乳類細胞 D.真菌 E. 大腸桿菌

　　21.在對目的基因和載體DNA進行同聚物加尾時用(E)

　　A.反轉錄酶 B.多聚核苷酸激酶 C.引物酶 D.RNA聚合酶 E.末端轉移酶

　　22.重組DNA技術常用的限制性核酸內切酶為(B)

　　A.Ⅰ類酶 B.Ⅱ類酶 C.Ⅲ類酶 D.Ⅳ類酶 E.Ⅴ類酶

　　23.在分子生物學領域，分子克隆專指(C)

　　A.細胞克隆 B.RNA克隆 C.DNA克隆 D.抗體克隆 E.mRNA克隆

　　24.用于重組DNA的限制性核酸內切酶識別核苷酸序列的(D)

　　A.正超螺旋結構 B.負超螺旋結構 C.螺旋結構 D.回文結構 E.鋅指結構

　　25.在基因工程中通常所使用的質粒是(B)

　　A.細菌的染色體DNA B.細菌染色體外的DNA C.病毒染色體DNA

　　D.病毒染色體外的DNA E.噬菌體DNA

　　26.構建基因組DNA文庫時，首先需分離細胞的(A)

　　A.染色體DNA B.線粒體DNA C.總mRNA D.tRNA E.rRNA

　　27.建cDNA文庫時，首先需分離細胞的(C)

　　A.染色體DNA B.線粒體DNA C.總mRNA D.tRNA E.rRNA

　　28.設計聚合酶鏈反應的引物時，應考慮引物與模板的(C)

　　A.5'端特定序列互補 B.5'端任意序列互補

　　C.3'端特定序列互補 D.3'端任意序列互補 E.中間序列互補

　　29.用于鑒定轉化子細胞是否含重組DNA的最常用方法是(A)

　　A.抗藥性選擇 B.分子雜交選擇 C.RNA反轉錄 D.免疫學方法 E.體外翻譯

　　30.確切地講，cDNA文庫包含 (E)

　　A.一個物種的全部基因信息 B.一個物種的全部mRNA信息

　　C. 一個生物體組織或細胞的全部基因信息

　　D.一個生物體組織或細胞的全部mRNA信息 E.一個生物體組織或細胞所表達mRNA信息

　　31.利用聚合酶鏈反應擴增特異DNA序列重要原因之一是(C)

　　A. 反應體系內存在特異DNA模板 B.反應體系內存在特異RNA模板

　　C.反應體系內存在特異DNA引物 D.反應體系內存在特異RNA引物

　　E. 反應體系內存在的TaqDNA聚合酶具有識別特異DNA序列的作用

　　32.表達人類蛋白質的最理想的細胞體系是(E)

　　A.E.coli表達體系 B.原核表達體系 C.酵母表達體系

　　D.昆蟲表達體系 E.哺乳類細胞表達體系

　　33.下列描述最能確切表達質粒DNA作為克隆載體特性的是(D)

　　A.小型環狀雙鏈DNA分子 B.攜帶有某些抗藥性基因

　　C.在細胞分裂時恒定地傳給子代細胞 D.具有自我復制功能 E.獲得目的基因

　　二、B型題(每小題1分)

　　A.抗藥性選擇

　　B.分子雜交選擇

　　C.RNA反轉錄

　　D.免疫學方法

　　E.體外翻譯

　　1.用于鑒定是否有質粒轉入受體菌的一般方法是(A)

　　2.用于鑒定轉化子細胞是否含目的基因的常用方法是 (B)

　　3.利用目的基因表達產物的特異性抗體來篩選含目的基因的轉化子細胞的方法是(D)

　　A.限制性核酸內切酶 B.DNA連接酶 C.反轉錄酶

　　C. TaqDNA聚合酶 E.堿性磷酸酶

　　4.識別DNA回文結構并對其雙鏈進行切割的是(A)

　　5.用于聚合酶鏈反應的酶是(D)

　　6.將目的基因與載體DNA進行拼接的酶是(B)

　　A.支原體 B.衣原體 C.噬菌體 D.細菌 E.酵母

　　7.常用作原核表達體系的是(D)

　　8.常用作真核表達體系的是(E)

　　A.基因組文庫

　　B.cDNA文庫

　　C.mRNA文庫

　　D.tRNA文庫

　　E.rRNA文庫

　　9.分離細胞染色體DNA可制備(A)

　　10.分離細胞總mRNA可制備(B)

　　A.轉染

　　B.轉化

　　C.感染

　　D.轉導

　　E.轉位

　　11.以質粒為載體，細菌為宿主的導人方式是(B)

　　12.以噬菌體為載體，細菌為宿主的導人方式是(A)

　　13.以病毒為載體，哺乳動物細胞株為宿主的導人方式是(C)

　　A.抗藥性選擇 B.RNA反轉錄 C.免疫化學方法 D.體外翻譯 E.PCR

　　14.對重組體進行直接選擇的方法是(A)

　　15.通過鑒定基因表達產物篩選重組體的方法是(C)

　　A.RNA聚合酶 B.末端轉移酶 C.堿性磷酸酶 D.反轉錄酶 E.核苷酸酶

　　16.切除DNA末端磷酸基用(C)

　　17.在DNA3'羥基末端進行同聚物加尾用(B)

　　18.合成cDNA用(D)

　　三、X型題(每小題1分)

　　1. 可用作克隆載體的DNA分子有(BD)

　　A.染色體DNA B.病毒DNA C.細菌染色體DNA D.噬菌體DNA E.特殊的蛋白質

　　2.重組DNA基本過程包括(ABCDE)

　　A.目的基因的獲取 B.克隆載體的構建 C.目的基因與載體的拼接

　　D.重組分子導入受體菌 E.轉化菌的篩選

　　3.基因克隆又稱(BC)

　　A. 重組RNA B.重組DNA C.DNA克隆 D.RNA克隆 E.蛋白質克隆

　　4.組成PCR反應體系的通常有(ABCDE)

　　A.DNA引物 B.耐熱的DNA聚合酶 C. dNTP D.DNA模板 E.Mg2+

　　5.對于重組體的篩選，屬直接選擇法的有(BD)

　　A. 免疫化學法 B.Southern 印跡 C.酶聯免疫法 D.標志補救 E.Westhern 印跡

　　6.對于重組體的篩選，屬非直接選擇法的有(ACE)

　　A.免疫化學法 B. Southern 印跡 C.酶聯免疫法 D.標志補救 E.Westthern 印跡

　　7.限制性核酸內切酶切割DNA時，通常產生(ABD)

　　A.5'突出黏端 B.平末端 C. 3'磷酸末端 D. 3'突出黏端 E. 5'磷酸末端

　　8.基因工程中目的基因的來源可以是(ABDE)

　　A. 化學合成 B.PCR合成 C.LCR合成 D.cDNA文庫 E. 基因組中直接獲得

　　9.重組DNA時，外源基因又稱(AC)

　　A.目的基因 B.目的RNA C.目的DNA D.外源RNA E. 載體基因

　　10.可作為重組DNA的目的基因有(CD)

　　A.mRNA B.cRNA C.cDNA D.DNA E.rRNA

　　四、填空題(每空0.5分)

　　1.通過自動獲取或人為地供給外源______，使細胞或培養的受體細胞獲得新的______，這就是轉化作用。【DNA;遺傳表型】

　　2.由__________和__________介導的基因移位或重排，稱為轉座。【插入序列;轉座子】

　　3.一個完整的基因克隆過程應包括：目的基因的獲取，______的選擇與改造，_________和__________連接為重組DNA，重組DNA分子導入_________，篩選出含感興趣基因的重組DNA轉化細胞。【克隆載體;目的基因;載體DNA;受體細胞】

　　4.限制性核酸內切酶是一類識別并水解_________________的核酸___________酶。

　　【雙鏈DNA特異序列;內切】

　　5.科學家感興趣的外源基因又稱___________，其來源有幾種途徑：化學合成，酶促合成cDNA，制備的基因組DNA及_________技術。【目的基因;PCR】

　　6.外源DNA離開染色體是不能復制的。將_______與______連接，構建成重組DNA分子，外源DNA則可被復制。 【外源基因;載體DNA】

　　7.根據克隆載體性質不同，將重組DNA分子導人細菌的方法有_______、________及感染。【轉化;轉染】

　　五、名詞解釋題(每小題2分)

　　1.質粒 【是存在于細菌染色體外的小型環狀雙鏈DNA分子。質粒分子本身是含有復制功能的遺傳結構，能在宿主細胞獨立自主地進行復制，并在細胞分裂時恒定地傳給子代細胞。質粒帶有某些遺傳信息，所以會賦予宿主細胞一些遺傳性狀。因為質粒DNA有自我復制功能及所攜帶的遺傳信息等特性，故可作為重組DNA操作的載體。】

　　2.限制性核酸內切酶 【就是識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類核酸內切酶。限制性核酸內切酶存在于細菌體內，與相伴存在的甲基化酶共同構成細菌的限制――修飾體系，限制外源DNA、保護自身DNA，對細菌遺傳性狀的穩定遺傳具有重要意義。限制性核酸內切酶分為三類。重組DNA技術中常用的限制性內切核酸酶為Ⅱ類酶。】

　　3.載體 【即基因載體，或稱克隆載體，是在基因工程中為“攜帶”感興趣的外源DNA、實現外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些DNA分子，具有自我復制和表達功能。其中，為使插入的外源DNA序列可轉錄,進而翻譯成多肽鏈而特意設計的克隆載體又稱表達載體。克隆載體有質粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA，它們經適當改造后仍具有自我復制能力，或兼有表達外源基因的能力。】

　　4.DNA克隆 【就是應用酶學的方法，在體外將各種來源的遺傳物質――同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA與載體DNA結合成一個具有自我復制能力的DNA分子――復制子，繼而通過轉化或轉染宿主細胞、篩選出含有目的基因的轉化細胞，再進行擴增、提取獲得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又稱基因克隆、重組DNA或基因工程。】

　　5.目的基因 【應用重組DNA技術有時是為分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列，或是為獲得感興趣基因的表達產物――蛋白質。這些感興趣的基因或DNA序列就是目的基因，又稱目的DNA。目的DNA有兩種類型，即cDNA和基因組DNA。】

　　6.同源重組 【發生在同源序列間的重組稱為同源重組，又稱基本重組。同源重組的發生依賴兩分子之間序列的相同或類似性。如果通過轉化或轉導獲得的外源DNA與宿主DNA同源，那么外源DNA就可以通過同源重組方式整合進宿主染色體。】

　　7.cDNA文庫 【以mRNA為模板，利用反轉錄酶合成與mRNA互補的DNA，即cDNA，再復制成雙鏈cDNA片段，與適當載體連接后轉入受體菌。不同細菌包含了不同mRNA為模板的cDNA分子或片段，這樣生長的全部細菌所攜帶的各種cDNA分子或片段就代表了整個組織或細胞表達的各種mRNA信息，即cDNA文庫。】

　　8.基因組DNA文庫 【利用限制性核酸內切酶將染色體DNA切割成一定基因水平的許多片段，其中即含有人們感興趣的基因片段。將這些片段分于與適當的克隆載體拼接成重組DNA分子，繼而轉入受體菌，使每個細菌內都攜帶一種重組DNA分子。不同細菌所包含的重組DNA分子可能為不同的染色體DNA片段，這樣全部轉化細菌所攜帶的各種染色體片段就代表了染色體的整個基因組。存在于轉化細菌內、由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA片段的集合稱基因組DNA文庫。基因組DNA文庫涵蓋了基因組全部基因信息。】

　　9.轉座 【在基因組內有些基因可以從一個位置移動到另一位置。這些可移動的DNA序列包括插入序列和轉座子。由插入序列和轉座子介導的基因移位或重排現象稱為轉座。】

　　六、簡答題

　　1.簡述基因位點特異的重組和同源重組的差別。 (4分)

　　【位點特異的重組和同源重組概念;前者需要整合酶，發生在兩個DNA序列的特異位點間;后者不需要特異DNA序列，而是依賴兩分子之間序列的相同或類似性，但也需要特異酶催化。】

　　2.何謂限制性核酸內切酶?寫出大多數限制性核酸內切酶識別DNA序列的結構特點。(3分)

　　【解釋限制性內切核酸酶;酶識別DNA位點的核苷酸序列呈回文結構】

　　3.解釋質粒，為什么質粒可作為基因載體。 (4分)

　　【參見“質粒”’名詞解釋;質粒的復制及表達功能、選擇標志基因。】

　　七、論述題

　　1.何謂基因克隆?簡述基因克隆的基本過程。 (7分)

　　【以質粒為載體進行DNA克隆的過程(為例)包括：目的基因的獲取，基因載體的選擇與構建，目的基因與載體的拼接，重組DNA分子導人受體細胞，篩選并無性繁殖含重組分子的受體細胞。】

　　2.何謂目的基因?寫出其主要來源或途徑。 (6分)

　　【參見“目的基因”名詞解釋。】

　　3. 何謂基因載體，說出哪些DNA可作為基因的載體。(5分)

　　【參見“基因載體”名詞解釋。】